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程序性死亡分子1胞外区的表达及其 抗血清对PCV2增殖的影响
王林青,徐朋丽,陈曦艋,李洪炫,陈红英,赵丽
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(郑州师范学院分子生物学郑州市重点实验室,郑州 450044; 河南农业大学动物医学院,郑州 450046;河南牧业经济学院动物医药学院,郑州450046)
摘要:
为研究猪的程序性死亡分子1(PD-1)胞外区参与猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)感染的免疫调节功能,PCR扩增健康猪舌组织中PD-1胞外区,构建重组表达质粒pET-28a-PD-1,转化至Rosetta(DE3)。经IPTG 诱导表达后,采用SDS-PAGE和Western Blot 检测重组PD-1胞外段蛋白 exPD-1表达情况。结果显示,重组菌pET-28a-PD1/ DE3,在37 ℃、0.5 mmol·L-1 IPTG诱导8 h时,exPD-1蛋白的表达量最高,大小约为20 kDa,且以包涵体形式表达。然后将经纯化和复性获得的exPD-1辅以佐剂免疫新西兰兔,制备兔抗exPD-1血清,经Western Blot检测结果显示该抗血清具有较好的反应原性。用PCV2感染猪肾(Porcine kidney-15,PK-15)细胞,采用荧光定量PCR检测PD-1转录水平,结果显示PCV2感染PK-15细胞1 ~ 48 h时PD-1的mRNA转录水平均下调;用兔抗exPD-1血清处理PK-15细胞后感染PCV2,PD-1的转录水平显著上调(P < 0.01),且明显地抑制了PCV2的复制(P < 0.01)。上述结果表明,在体外PCV2感染可引起PD-1转录水平下调,兔抗exPD-1血清可通过封闭PD-1/PD-L1通路,抑制PCV2增殖。
关键词:  程序性死亡分子1  表达  兔抗PD-1血清  PCV2
DOI:10.13610/j.cnki.1672-352x.20220705.018
基金项目:中原知名专家项目(204200510015), 河南省高校科技知名专家支持计划(21HASTIT039), 河南省高等学校青年骨干教师培养计划(2018GGJS161)和河南牧业经济学院博士启动资金(2020HNUAHEDF010)共同资助。
Expression of PD-1 extracellular domain and affection on PCV2 proliferation of rabbit serums against PD-1
WANG Linqing,XU Pengli,CHEN Ximeng,LI Hongxuan,CHEN Hongying,ZHAO Li
(Zhengzhou Key Laboratory of Molecular Biology, Zhengzhou Normal University, Zhengzhou 450044; College of Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450046;College of Veterinary Medicine, Henan University of Animal Husbandry and Economy, Zhengzhou 450046)
Abstract:
Key words:  programmed death 1  expression  rabbit anti-PD-1 serum  PCV2

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