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| 红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)卵黄蛋白原未知功能结构域 (DUF1943)的原核表达及纯化鉴定 |
| 王瑞,韦孜娜,吕敏,杨彦豪,黄黎明,韦秀颖,卢天和,黄光华,杨慧赞 |
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| (广西壮族自治区水产科学研究院，南宁 530021;广西大学动物科学技术学院，南宁 530005) |
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| 摘要: |
| 通过外源表达并纯化得到红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)的DUF1943结构域片段，为开展其后续相关功能及机制研究奠定基础。根据GenBank数据库中公布的红螯螯虾卵Vg基因序列(登录号AF306784.1)，查找到DUF1943结构域的氨基酸序列(617—918aa)，对其理化性质与基本结构等进行了理论评估，结合大肠杆菌密码子偏好对其进行了序列改造和密码子优化，采用全基因合成的方法得到了DUF1943的基因片段，将其连接到Pet28a(+)内构建了Pet28a(+)-DUF1943的融合表达载体，探索了该融合载体在大肠杆菌系统中的最佳表达参数，采用溶解法和上柱层析法对收获到的蛋白包涵体进行复性。全基因合成方法制备得到的DUF1943目的基因为921 bp，成功构建了Pet28a(+)-DUF1943的融合表达载体，诱导Pet28a(+)-DUF1943表达的最佳条件为：当单克隆菌液OD600达到0.6 时，添加0.5 mmol·L-1 的诱导剂IPTG，置于37 ℃条件下培养4 h。表达的DUF1943多肽以包涵体形式为主，在SDS-PAGE胶的35 kDa附近呈现特异性条带，收集包涵体进行破碎，经2 mol·L-1盐酸胍溶解和Ni-NTA层析后最终收获到的活性蛋白浓度为0.6 mg·mL-1。成功构建了Pet28a(+)-DUF1943原核表达载体并优化了表达系统及蛋白复性方案，获得了DUF1943活性多肽，为进一步研究其生物功能及应用奠定了基础。 |
| 关键词: 卵黄蛋白原 DUF1943基因 原核表达 纯化 复性 |
| DOI：10.13610/j.cnki.1672-352x.20220106.021 |
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| 基金项目:广西科技重大专项课题(桂科AA17204095-5), 广西自然科学基金项目(2019GXNSFAA185036), 广西重点研发项目(桂科AB18221068)和广西科技重大专项(桂科AA17204094-7)共同资助。 |
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| Prokaryotic expression and purification of the domain of unknown function of vitellogenin (DUF1943) in Cherax quadricarinatus |
| WANG Rui,WEI Zina,LYU Min,YANG Yanhao,HUANG Liming,WEI Xiuying,LU Tianhe,HUANG Guanghua,YANG Huizan |
| (Guangxi Academy of Fishery Sciences, Nanning 530021;College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530005) |
| Abstract: |
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| Key words: Cherax quadricarinatus DUF1943 prokaryotic expression purification renaturation |