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黑翅土白蚁ISSR-PCR体系的建立与优化
龙雁华,濮龙军,李娟,王众,杨云秋
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(安徽农业大学生命科学学院,合肥 230036;安徽农业大学生命科学学院,合肥 230036; 中国海洋大学海洋生命学院,青岛 230036;安徽农业大学生物技术中心,合肥230036;安徽省蚌埠市白蚁防治研究所,蚌埠 233000;安徽农业大学茶与食品科技学院,合肥 230036)
摘要:
采用单因子梯度优化的方法,对已初步建立的黑翅土白蚁ISSR-PCR的反应体系在dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度、模板量及TaqDNA聚合酶用量等方面进行了优化。结果表明,适用于黑翅土白蚁的ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度分别为:dNTPs 0.2 mmol·L-1,Mg2+ 3.0 mmol·L-1,引物浓度0.4 μmol·L-1,模板用量DNA 20 ng,TaqDNA聚合酶2.5 U。
关键词:  黑翅土白蚁  ISSR-PCR  优化
DOI:
基金项目:安徽省教育厅自然科学项目(KJ2013A121, KJ2012A104), 国家自然基金项目(31200490)和安徽农业大学稳定与引进人才项目(WD2011-10)共同资助。
Establishment and optimization of ISSR-PCR system in Odontotermes formosanus
LONG Yan-hua,PU Long-jun,LI Juan,WANG Zhong,YANG Yun-qiu
(School of life sciences, Anhui Agricultural University, Hefei 230036;School of life sciences, Anhui Agricultural University, Hefei 230036; College of Marine Life Sciences, Ocean University of China, Qindao 266003;Biotechnology Center, Anhui Agricultural University, Hefei 230036;Institute of Termite Control of Bengbu, Bengbu 233000;School of Tea Food Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 230036)
Abstract:
Single factor test of concentration of dNTP, Mg2+, Taq DNA polymerase, primer and DNA template was used to optimize the ISSR-PCR amplification system which has been established initially. The results showed that suitable ISSR-PCR reaction system for Odontotermes formosanus was 20 μl reaction system containing 2.5 U Taq DNA polymerase, 2.0 mmol·L-1 Mg2+, 0.1 mmol·L-1 dNTP, 1.0 μmol·L-1 primer and 20 ng DNA template.
Key words:  Odontotermes formosanus  ISSR-PCR  optimization

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