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稻褐飞虱羧酸酯酶基因的克隆与表达
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摘要:
以稻褐飞虱的cDNA为模板,进行PCR扩增,获得约1 900 bp的DNA片段.通过T-A克隆,将PCR产物插入pMD18-T载体中.再以此重组载体为模板,以羧酸酯酶成熟蛋白基因(cae-M)的特异性引物进行PCR扩增.将cae-M扩增产物和pET28a分别用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,酶切产物纯化后在T4连接酶作用连接成重组表达载体pET28a-cae-M.将pET28a-cae-M转化BL21(DE3),经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约62 kD外源蛋白带.蛋白质印迹分析表明,该外源蛋白与6×His融合表达.
关键词:  稻褐飞虱  羧酸酯酶  克隆  原核表达  稻褐飞虱  羧酸酯酶基因  克隆与表达  Escherichia coli  brown planthopper  expression  融合表达  外源蛋白  分析表  蛋白质  白带  IPTG  转化  重组表达载体  连接酶  作用  产物纯化  双酶切  扩增产物  特异性引物
DOI:
投稿时间:2005-05-05
基金项目:江苏省自然科学基金
Cloning and expression of brown planthopper carboxylesterase in Escherichia coli
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Abstract:
Key words:  brown planthopper  carboxylesterase  cloning  porkaryotic expression

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