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菌物生物技术:外源蛋白在米曲霉中的表达及分泌
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摘要:
米曲霉是与工业用酶及食品发酵相关的重要微生物,其分泌蛋白的能力有望将其用于外源蛋白表达的遗传工程研究。为了构建米曲霉的转化系统,首先由紫外照射,分离获argB^-突变株,再通过CaCl2调节的化学方法和电穿孔技术将携带构巢曲霉argB基因的质粒导入米曲酶受体细胞,经筛选获得多拷贝及遗传稳定的转化子,转化频率为10~50转化子/ug DNA。虽然构巢曲霉与米曲霉argB基因的同源性不高,但前者对后者argB^-突变能起到补偿作用。在电场调节的转化中--电穿孔,适宜条件为6.3kV/cm和1540ohm。电场中,原生质体相对于非原生质体在1.3kV/cm条件成活率为80%,而6.3kV/cm下为50%。为了实现外源基因在米曲霉中的表达,天然植物源的蜜饯--奇甜蛋白基因及构巢曲霉中作为营养选择标记的argB通过共转化被引入受体细胞中,然后从培养基中获得与纯化的奇甜蛋白相似的具免疫活性的22kDa分子量的蛋白质,这说明植物中的信号序列同样可在米曲霉中起作用,调节奇甜蛋白分泌到细胞外。
关键词:  米曲霉 转化 奇甜蛋白基因 分泌作用 生物技术
DOI:
基金项目:
Fungal Biotechnology:Expression and Secretion of Heterologous Proteins in Aspergillus oryzae
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Abstract:
Key words:  Aspergillus oryzae Transfomation Thaumatin gene Secretion

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